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大肠杆菌(Escherichia coli)是一种常见的革兰氏阴性杆菌，存在于许多生物的肠道中。大肠杆菌表达的重组蛋白可以在细菌的细胞质中或者分泌到周质中，也可以分泌到细胞外。渗透休克法是一种常用的周质蛋白的提取方法，通过利用渗透压的变化来释放出细胞周质蛋白。

• 将隔夜培养的大肠杆菌取1.2mL分装于2mL离心管内；
  
• 4℃，4000rpm离心20min；
  
• 收集菌体，倒去上层培养基；
  
• 加入1.2mL E.coli周质蛋白纯化溶液A洗涤菌体。
  
• 洗涤后将菌体重悬于0.6mL E.coli周质蛋白纯化溶液B中，用吸管反复吹吸菌体，使菌体充分打散；
  
• 室温摇晃10min；
  
• 4℃，4000rpm离心30min；
  
• 迅速弃去上清，将离心管倒置于纸巾中，彻底吸干多余的溶液B。
  
• 迅速加入0.6mL E.coli周质蛋白纯化溶液C，用吸管反复吹吸菌体，菌体充分打散；
  
• 然后置于冰上20min后；
  
• 4000rpm离心30min；
  
• 小心吸取上清至1.5mL离心管中，即为周质蛋白。